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默片钳是研究离子通过膜离子通道运动的一种技术,即用一微电极封住(钳住)细胞膜片表面,然后测量通过这一部分膜上的电流。
基本原理
它又称单通道电流记录技术,用特制的玻璃微吸管吸附于细胞表面,使之形成10~100的密封(giga-seal),被孤立的小膜片面积为μm量级,内中仅有少数离子通道。然后对该膜片实行电压钳位,可测量单个离子通道开放产生的pA(10安培)量级的电流,这种通道开放是一种随机过程。通过观测单个通道开放和关闭的电流变化,可直接得到各种离子通道开放的电流幅值分布、开放几率、开放寿命分布等功能参量,并分析它们与膜电位、离子浓度等之间的关系。还可把吸管吸附的膜片从细胞膜上分离出来,以膜的外侧向外或膜的内侧向外等方式进行实验研究。这种技术对小细胞的电压钳位、改变膜内外溶液成分以及施加药物都很方便。
用 途
金属离子作用于细胞膜行为的研究细胞膜离子通道的性质鉴定及其:
动力学研究
细胞分泌的研究
信号转导的研究
分子生物学研究
应用举例
(1). 膜片钳技术在通道研究中的重要作用
(2).与药物作用有关的心肌离子通道
(3).对离子通道生理与病理情况下作用机制的研究
(4).对单细胞形态与功能关系的研究
(5).对药物作用机制的研究
(6). 在心血管药理研究中的应用
(7). 创新药物研究与高通量筛选
仪器主要组成及特点
1、Ti专业荧光显微镜图像分析系统(机型可选);
2、Axopatch200B/700B电容反馈型膜片钳;
3、数据采集卡软件;
4、灌流系统(8通道,带温度控制)PS25-cell(可选)
5、成茂显微操作系统(细胞)
6、电极拉针器;
7、防震台含静电屏蔽网
8、监视器