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CytoFLEX nano如何实现细胞外囊泡多色分型?
2024-10-19     来源:贝克曼库尔特商贸(中国)有限公司   >>进入该公司展台 

在我们探索EV功能的时候,最基础的3个参数就是EV样品的浓度,粒径和分型。


浓度:EV的浓度信息对于发现新的生物标志物(即疾病相关的分子标志)以及诊断疾病都非常关键。同时,通过精准地测量EV的浓度,研究人员能够更好地追踪病人的疾病进展,并评估治疗是否有效。


粒径:通过EV粒径检测,可有效区分不同EV亚型,更深入地了解其起源或功能。EV粒径检测对于EV样品制备的标准化和质量控制同样至关重要。


分型:研究人员还需对EV进行表征并识别其蛋白表达。对EV进行表征分析,有助于研究人员了解EV的生物学功能,破译EV在细胞间携带的特定信息/信号,发现内含物中的疾病特异性分子(DNA、RNA、microRNA等)。


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“ 采用流式细胞术可以同步获取这些重要参数,特别是可以通过测定EV中或膜表面的蛋白表达,检测颗粒的物理和化学特性。随着对EV研究的不断深入,研究者们的关注点已经从整体EV群体逐步转向更为细致的EV亚群分析,这种转变有助于更精确地揭示EV在生理和病理过程中的具体功能。”


我们以从健康供体中分离的PPP(去血小板血浆)EV分群为例。3mL全血在200xg下离心5分钟。从顶部取出1mL血浆,并通过200nm注射器过滤。使用70nm尺寸排阻柱(SEC)纯化PPP。筛选出的组分用于单色染色和多色染色进行免疫分型。然后用以下抗体对选定的PPP组分进行染色:CD81 PB、CD9 FITC、CD63 APC、CD61 PC7和CD235a PE。在CytoFLEX纳米流式细胞仪上采集样本,并在CytExpert nano中进行分析。


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检测EV样本时,样品清洁度至关重要,因此在检测前需要确保仪器的背景噪声足够低。CytoFLEX nano自带Baseline检测功能,可以自动检查鞘液并基于满足QC要求的预设阈值,自动监测并分析背景信号,快速评估仪器清洁度。在运行实验的同时,Baseline检测功能也可以即时检查仪器和缓冲液清洁度,保证样品间携带污染率小于1%。


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在上样前,选择合适的样品浓度至关重要,以避免出现swarm现象。我们通过EPS(<6000 eps)、100%事件处理和避免粘连体,MdFI等维度,选择适合的样品稀释比例。


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在获取检测数据后,我们按照以下设门策略进行数据分析:


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1.Gate on Singlets

2.Gate out CD235+ (possible aggregates) 

3. From CD235-, identify CD61+ (Platelet-originated EVs) and CD61- 

4. Further identify CD9+ and CD9- The last plots help to identify CD81+ and CD63+ from these subpopulation


CytoFLEX nano 纳米流式分析仪使研究人员能够清晰检测血浆来源的EV。该分析仪可准确检测和区分单个PPP EV颗粒(包括PB、FITC、PE、APC和PC7) 上的多个荧光通道中的信号,便于用户监测低表达的稀有阳性亚群(如CD63和标记红细胞污染的CD235a)。


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11月1日,我们将与多位行业专家齐聚深圳,共同探讨EV在多个领域的最新前沿应用,并分享从科学研究到商业化产品的完整开发路径。


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